Sezione di Istologia ed Embriologia - Laboratorio di Biologia della Riproduzione e dello Sviluppo

(Responsabili: Prof. De Felici Massimo – Prof. Antonietta Salustri )
Le attività del laboratorio sono focalizzate all’identificazione di approcci innovativi per promuovere il  differenziamento, la crescita e la maturazione degli ovociti e l'impianto di embrioni utilizzando il modello murino. Gli obiettivi sono di è fornire nuovi strumenti per prevenire e trattare condizioni di infertilità femminile e per sviluppare test di screening per i composti reprotossici.
Area di Attività
  •  Biologia delle cellule germinali primordiali (PGC) (De Felici, Klinger).
  • Dinamiche della riserva ovocitaria (Klinger, De Felici).
  • Identificazione di biomarcatori della qualità ovocitaria (Camaioni, Salustri).
  • Matrice extracellulare e selezione degli spermatozoi (Camaioni, Salustri).
  • Ormoni, fattori di crescita e molecole anti-infiammatorie implicate nell’impianto embrionale e nel successo della gravidanza (Camaioni, Campagnolo, Salustri).
  • Morfogenesi della placenta e patologie associate (Campagnolo)
  • Nanomateriali: valutazione della sicurezza utilizzando modelli in vivo e in vitro e applicazioni biomediche (Campagnolo).
  • Biologia delle cellule  staminali embrionali (ES) e mesenchimali (MS) (Camaioni, Campagnolo, De Felici, Klinger, Salustri).
  • Ruolo delle neurotrofine neel cellule germinali (Russo).
Tecniche Sperimentali
  • Isolamento e coltura di PGCs, tessuti ovarici e ovociti peri-ovulatori.
  • Analisi di espressione genica in cellule ovariche and uterine e in embrioni pre-impianto.
  • Fecondazione in vitro e trasferimento di embrioni.
  • Colture in vitro di embrioni pre-impianto.
  • Coltura e manipolazione di cellule ES e MS   
  • Test di tossicità in vitro di composti (in particolare: interferenti endocrini, agenti chemioterapici, nanomateriali) su cellule germinali, embrioni pre-impiantato e cellule ES.
  • Colture cellulari, tecniche istologiche di base, immunolocalizzazione, analisi di immagine, trasfezione cellulare,Western blotting, ELISA, RT- e RTq-PCR
 
Strutture del Laboratorio
  • Una stanza per il processamento di preparati istologici (microtomo, water begnetto termostatato, cappa chimica, piastra termostatata, forno per paraffina, aramdio per solventi pericolosi)
  • Una stanza per l’analisi morfologica di tessuti e cellule  (microscopio inverito e non a fluorescenza con telecamera, computers)
  • Due stanze sterili per la coltura di cellule (instruments: incubatori, cappe a flusso verticale e laminare, bagnetto termostatato, stereomicroscopi, microscopio inverito, centrifughe, frigoriferi e congelatori )
  • Quattro laboratori di biochimica e biologia molecolare completamente attrezzato per le tecniche di routine
  • Tre stanze per strumenti comuni (bilancia analitica, -80°C Freezers, termociclatore per RT-PCR, macchinario per Real Time PCR, freezers, criostato, spettrofotometro, lettore ELISA, Luminometro, Sonicatore, Cytofluorimetro, Speedvac, agitator di batteri
  • Una camera oscura per lo sviluppo di lastre
  • Una camera fredda (centrifiga e agitatore)
  • Un magazzino
The laboratory's activities focuses on identifying innovative approaches to promote differentiation, growth and maturation of oocytes and the embryo implantation using the mouse model. The laboratory's goal is to provide new tools to prevent and treat female infertility conditions and to develop screening tests for reprotoxic compounds.
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Area of Activity
  • Primordial germ cell (PGC) biology (De Felici, Klinger).
  • Oocyte reserve dynamics (Klinger, De Felici).
  • Identification of biomarkers of oocyte quality (Camaioni, Salustri).
  • Extracellular matrix sieve for sperm selection (Camaioni, Salustri).
  • Hormones, growth factors and anti-inflammatory molecules improving embryo implantation and pregnancy outcome (Camaioni, Campagnolo, Salustri).
  • Placental morphogenesis and associated pathologies (Campagnolo)
  • Engineered nanomaterials: safety assessment using in vivo and in vitro models and biomedical applications (Campagnolo).
  • Embryonic (ES) and mesenchymal stem (MS) cell biology (Camaioni, Campagnolo, De Felici, Klinger, Salustri).
  • Neurotrophins in germ cell development (Russo)
Experimental Techniques
  • Isolation and culture of PGCs, ovarian tissues and peri-ovulatory oocytes.
  • Gene expression analysis in ovarian and uterine cells and pre-implantation embryos.
  • In vitro fertilization and embryo transfer, in vitro culture of pre-implantation embryos.
  • Culture and manipulation of ES and MS cells.
  • Toxicity in vitro testing of compounds (specifically: endocrine disruptors, chemiotherapic agents, nanomaterials) on germ cells, preimplantation embryos and ES cells.
  • Cell culture, standard histological techniques, immunolocalization, image analyses, cell transfection, Western blotting, ELISA, RT- and RTq- PCR.
Laboratory facilities
  • One room for histological procedures (instruments: microtome, wet bath, hot plate, fume hood, paraffin oven, hazardous solvent cabinet)
  • One room for tissues and cell morphological analysis (instruments: 1 inverted and 1 fluorenscence microscopes with cameras, computers)
  • Two sterile rooms for cell culture (instruments: incubators, biosafety cabinets, laminar flow hoods, Bunsen burners, stereomicroscopes and microscopes, wet bath, centrifuges, refrigerators and freezers,)
  • Four biochemistry and molecular biology laboratories fully equipped for routine techniques
  • Three rooms for common instruments (analytical balance, Ultra-Low Temperature Freezers, termocycler for RT-PCR, Real Time PCR machine, freezers, cryostat, spettrophotometer, ELISA Reader, Luminometer, Sonicator, Cytofuorimeter, Speedvac, bacterial shaker)
  • One Dark room for film develop
  • One Cold room (shaker, centrifuge)
  • One Stock room